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    荧光染料大总结

        

        荧光显微镜技术的基本原理是借助荧光剂让细胞成分呈现高度具体的可视化效果华体汇体育app|最新下载 ,比如在目的蛋白后面连一个通用的荧光蛋白—GFP。在组织样本中华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 ,目的基因无法进行克隆华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 ,则需要用免疫荧光染色等其他技术手段来观察目的蛋白华体汇体育app|最新下载 。为此华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 ,就需要利用抗体,这些抗体连接各种不同的荧光染料华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 ,直接或间接地与相应的靶结构相结合华体汇体育app|最新下载 。此外华体汇体育app|最新下载 ,借助荧光染料华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 ,荧光显微镜技术不只局限于蛋白质华体汇体育app|最新下载 ,它还可以对核酸华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 、聚糖等其他结构进行染色华体汇体育app|最新下载 ,即便钙离子等非生物物质也可以检测出来华体汇体育app|最新下载 。本文就对几种常用的荧光剂进行了具体的介绍华体汇体育app|最新下载 。

    免疫荧光 (IF)

        在荧光显微镜技术中,可以通过两种方式观察到你的目的蛋白:利用内源荧光信号华体汇体育app|最新下载 ,即通过克隆手段华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 ,用遗传学方法将荧光蛋白与目的蛋白相连华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 ;或利用荧光标记的抗体特异性结合目的蛋白。有些生物学问题采用第二种方法会更有用或更有必要华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 。比如华体汇体育app|最新下载 ,组织学样品无法使用荧光蛋白华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 ,因为通常来说华体汇体育app|最新下载 ,标本都是从无法保存荧光蛋白的生物体中获取华体汇体育app|最新下载 。此外华体汇体育app|最新下载 ,当有一个有功能的抗体可用时华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 ,免疫荧光法会比荧光蛋白技术快很多华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 ,因为后者必须先克隆目的基因再将DNA转染到适当的细胞中华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 。荧光蛋白的另一项劣势在于其本身属于蛋白质华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 。因此华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 ,细胞内的这些荧光蛋白具有特定的蛋白质特性华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 ,其会导致附着的目的蛋白质发生功能紊乱或出现误释的情况华体汇体育app|最新下载 。然而华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 ,荧光蛋白技术仍然是观察活细胞的首选方法。

        免疫荧光法利用了抗体可以和相应抗原特异性结合的这个特性,对此它还有两种不同的表现形式华体汇体育app|最新下载 。最简单的方式是使用可与目的蛋白相结合的荧光标记抗体华体汇体育app|最新下载 。这种方法被称为“直接免疫荧光法”。

        在很多情况下,我们可以利用两种不同特性的抗体。第一种抗体可以结合目的蛋白,但其本身并未进行荧光标记(一抗)。第二种抗体本身就携带荧光染料(二抗),并且可以特异性结合一抗华体汇体育app|最新下载 。这种方法被称为“间接免疫荧光法”华体汇体育app|最新下载 。这种方法存在诸多优势华体汇体育app|最新下载 。一方面华体汇体育app|最新下载 ,它会产生放大效应华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 ,因为不只一个二抗可以与一抗相结合华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 。另一方面华体汇体育app|最新下载 ,没有必要始终用荧光染料标记目的蛋白的每个抗体华体汇体育app|最新下载 ,但可以使用市售荧光标记的二抗华体汇体育app|最新下载 。免疫荧光中广泛使用的荧光染料包括 FITC、TRITC 或一些Alexa Fluor?染料,下文均有提及。

    FITC 和 TRITC

        异硫氰酸荧光素(FITC) 是一种有机荧光染料华体汇体育app|最新下载 ,目前华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 ,这种荧光染料仍用于免疫荧光和流式细胞术中华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 。在 495/517 nm 处华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 ,该染料会产生激发/发射峰值华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 ,并可借助异硫氰酸盐反应基团与不同抗体结合华体汇体育app|最新下载 ,该基团可以和蛋白质上的氨基、巯基华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 、咪唑华体汇体育app|最新下载 、酪氨酰华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 、羰基等基团相结合。而它的基本成分—— 荧光素华体汇体育app|最新下载 ,其摩尔质量为 332 g/mol华体汇体育app|最新下载 ,常被用作荧光示踪剂华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 。FITC(389 g/mol) 是用于荧光显微镜技术的首批染料,且其被当成 Alexa Fluor?488 等后续荧光染料的发端华体汇体育app|最新下载 。该染料的荧光活性取决于它的大共轭芳香电子系统华体汇体育app|最新下载 ,而该系统受蓝色光谱中的光所激发华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 。

        经常与 FITC 同时使用的另一种染料是与其相似的TRITC [四甲基罗丹明-5(6)-异硫氰酸]。与 FITC 相反华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 ,TRITC 并非荧光素华体汇体育app|最新下载 ,而是罗丹明家族的衍生物华体汇体育app|最新下载 。罗丹明也具有一个大的共轭芳香电子系统,正是该系统引发了它们的荧光行为华体汇体育app|最新下载 』寤闾逵齛pp|最新下载 ;褂幸坏阌隖ITC 相反华体汇体育app|最新下载 ,TRITC (479 g/mol) 由最大波长为 550nm的绿色光谱中的光所激发华体汇体育app|最新下载 ,它的最大发射波长为 573 nm。与蛋白质(例如华体汇体育app|最新下载 ,抗体)结合也基于异硫氰酸盐反应基团华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 。

        虽然 FITC 和 TRITC 仍在使用华体汇体育app|最新下载 ,但由于它们属于发光相对较弱的荧光染料且它们的优势仅仅是经济实惠华体汇体育app|最新下载 ,因此,在最新的显微镜技术中并不推荐华体汇体育app|最新下载 。

    青色素

        这类荧光染料相对较少华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 ,从青色素衍生而来,也是其名称的由来:Cy2华体汇体育app|最新下载 、Cy3华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 、Cy5 和Cy7华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 。上述所有青色素均可以通过其反应基团与核酸或蛋白相连华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 。例如华体汇体育app|最新下载 ,采用了蛋白标记的马来酰亚胺基团华体汇体育app|最新下载 。有趣的是,对于荧光华体汇体育app|最新下载 ,Cy5 对其周边电子环境非常敏感华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 ,该特征可用于酶测定。附着蛋白质的构象改变会导致荧光发射产生阳性或阴性变化。此外华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 ,Cy3 和 Cy5 还可用于 FRET 试验华体汇体育app|最新下载 。青色素染料是一种相对较老的荧光染料华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 ,但却是其他荧光染料在亮度、耐光性华体汇体育app|最新下载 、量子产率等方面得以改善的基础华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 。

    Alexa Fluor?染料

        Alexa Fluor?染料是带负电荷且亲水的荧光染料系列华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 ,该系列染料囊括范围较广华体汇体育app|最新下载 ,且经常用于荧光显微镜技术之中。这些染料的名称是由其发明者Richard Paul Haugland 以他儿子 Alex Haugland 的名字命名的。该产品标识是 Molecular Probes(美国生命科学技术公司 Life Technologies旗下子公司华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 ,注:2014年2月Life Technologies被Thermo Fisher收购)的商标华体汇体育app|最新下载 。此外,这些产品标识中也涵盖了相应的激光激发波长华体汇体育app|最新下载 。例如华体汇体育app|最新下载 ,应用范围很广且最大激发波长为 493 nm的Alexa Fluor?488,可由标准的488 nm激光激发华体汇体育app|最新下载 。Alexa Fluor?488的最大发射波长为 519 nm华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 ,正是因为具备上述特性华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 ,使得 Alexa Fluor?488与 FITC 的属性相似华体汇体育app|最新下载 。尽管 Alexa Fluor?488是一种荧光素衍生物华体汇体育app|最新下载 ,但与 FITC 相反,它拥有更佳的稳定性和荧光亮度华体汇体育app|最新下载 ,且 pH 敏感度也更低华体汇体育app|最新下载 。所有 Alexa Fluor? 染料(比如,Alexa Fluor?546华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 、Alexa Fluor?633)都是不同基础荧光物质的磺化形式华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 ,例如,荧光素华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 、香豆素、青色素或罗丹明华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 ,它们的摩尔质量在410 至 1400 g/mol 范围之内华体汇体育app|最新下载 。

    DNA 染色

        在荧光显微镜技术中华体汇体育app|最新下载 ,不只研究蛋白结构华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 ,核酸同样具有重要的研究意义。有时候,必须通过检测细胞核来确定细胞的精确位置及其数量。最常用的一种DNA 染色剂当属 DAPI (4',6-二脒基-2-苯基吲哚) 华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 ,其可与DNA 双螺旋的 A-T 富集区域相结合。如果 DAPI 附着到 DNA 上,其荧光强度将比游离状态要高华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 。该染色剂受最大波长为358 nm的紫外光激发华体汇体育app|最新下载 ,其发射光谱非郴寤闾逵齛pp|最新下载 华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 ??,在461 nm 处达到峰值。此外华体汇体育app|最新下载 ,还可对弱荧光进行 RNA 结合检测。在这种情况下华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 ,发射波长将转移至 500 nm华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 。有趣的是,DAPI 能够穿透整个细胞膜。因此华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 ,它可以用于固定和活细胞之中华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 。

        第二种被广泛使用的DNA 染色剂就是 Hoechst 染料系列,这些染料原先都是由 Hoechst AG 这家化学公司生产的华体汇体育app|最新下载 。Hoechst 33258华体汇体育app|最新下载 、Hoechst 33342以及Hoechst 34580 均为双苯酰亚胺华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 ,可嵌入 A-T 富集区域华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 ,因此华体汇体育app|最新下载 ,该系列染料很少用到华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 。与 DAPI 相似,这三种染色剂都可受最大发射波长为455 nm的紫外光激发华体汇体育app|最新下载 ,而未被结合的染色剂华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 ,其最大发射波长在 510–540 nm 之间华体汇体育app|最新下载 。Hoechst 染色剂还具有细胞渗透性,因此可用于活细胞或已固定的细胞中华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 。该染色剂与DAPI 的不同之处在于,它们的毒性较低。

    碘化丙啶(Propidium-Iodide华体汇体育app|最新下载 ,PI)是一种不能透过细胞膜的 DNA 染色剂华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 。由于具备上述特性华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 ,该染色剂无法进入完整的细胞中,因此,该染色剂常用于区分细胞群中的活细胞和死细胞。此外,碘化丙啶还是一种嵌入剂华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 ,但对于不同的碱基并不存在结合的差异性。该染色剂与核酸结合后,最大激发波长为538 nm华体汇体育app|最新下载 ,最大发射波长为 617 nm。未结合 PI 的最大激发和发射波长和光强会更低一些华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 。PI 还可结合 RNA华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 ,同时无需改变自身的荧光特性。有时候为了区分DNA 和 RNA华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 ,有必要使用适当的核酸酶华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 。

        不需要前期处理华体汇体育app|最新下载 ,吖啶橙就可以鉴别DNA 与 RNA 华体汇体育app|最新下载 。吖啶橙与 DNA 结合后华体汇体育app|最新下载 ,最大激发/发射波长为 502 nm/525 nm,而与 RNA 结合后,最大激发/发射波长为460 nm/650 nm华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 。此外华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 ,它还能够进入溶酶体等酸性区室。在这里华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 ,阳离子染料被质子化华体汇体育app|最新下载 。在这种酸性环境下,吖啶橙由蓝色光谱中的光激发华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 ,但发射波长在橙色区域达到最大。由于凋亡细胞具有大量被吞噬的酸性区室,因此华体汇体育app|最新下载 ,吖啶橙常用作此类细胞的标记物华体汇体育app|最新下载 。

    区室和细胞器特异性染料

        在荧光显微镜技术中华体汇体育app|最新下载 ,往往要对溶酶体华体汇体育app|最新下载 、核内体等细胞区室以及线粒体等细胞器进行染色华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 。为此华体汇体育app|最新下载 ,该部分介绍了一系列可供选择使用的特异性染料华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 。

        观察线粒体最常用的方法就是利用 MitoTracker?华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 ,它是一种可透过细胞的染料,包含轻度巯基化的氯甲基活性部分华体汇体育app|最新下载 。正因如此,它可与半胱氨酸残基的游离硫醇基反应华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 ,从而与基质蛋白实现共价结合华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 。MitoTracker? 有不同的颜色和修饰类型(参见表 1)华体汇体育app|最新下载 ,此外华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 ,它还是 Molecular Probes 的商标华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 。与罗丹明 123 (Rh123) 或 tetramethylrosamine等常规线粒体特异性染色剂不同华体汇体育app|最新下载 ,在用固定剂破坏膜电位后,MitoTracker?不会被洗掉华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 。

        依据线粒体染色剂华体汇体育app|最新下载 ,还有些染料可以标记溶酶体等酸性区室,这类染料被称为LysoTracker。它们由连接一个荧光基团的弱碱基团组成华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 ,具有膜穿透性华体汇体育app|最新下载 。最有可能的情况是华体汇体育app|最新下载 ,这些碱基因质子化作用的影响而对酸性区室具有亲和性。LysoTracker具有多种不同的颜色可供选择(参见表 1)华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 。

    与溶酶体相似的区室是酿酒酵母等真菌中的液泡华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 ,这种膜密闭空间也是一种酸性环境华体汇体育app|最新下载 。如果要在荧光显微镜下观察上述区室华体汇体育app|最新下载 ,则要使用FM 4-64?或FM 5-95?等苯乙烯基染料华体汇体育app|最新下载 。

        对于蛋白质分泌实验,内质网 (ER) 具有重要的研究意义。对上述区室进行染色的一种典型染料为DiOC6(3)华体汇体育app|最新下载 。该染料虽然偏好 ER华体汇体育app|最新下载 ,但仍会结合线粒体等其他细胞器膜华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 。对ER 进行特异性染色的另一种方法是,使用 ER-Tracker Green 和 Red 等 ER-Tracker华体汇体育app|最新下载 ,而 ER-Tracker Green 和 Red 是基于 BODIPY 的两种染料华体汇体育app|最新下载 ,其与格列本脲(一种磺趸寤闾逵齛pp|最新下载 华体汇体育app|最新下载 ;迕福┝?华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 ,并可与仅存于内质网膜上的ATP敏感性钾通道结合华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 。BODIPY(硼-二吡咯亚甲基,boron-dipyrromethene)是一种几乎不溶于水的华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 、对pH 相对不敏感的染料基团华体汇体育app|最新下载 ,该染料对蛋白质标记没太大用处华体汇体育app|最新下载 ,但却是脂质和膜标记的良好工具华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 。

        对于与ER相邻的高尔基体华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 ,可以用 NBD C6-ceramide 和BODIPYFL C5-ceramide 等荧光神经酰胺类似物对其进行标记华体汇体育app|最新下载 。 上述神经酰胺为鞘脂类,其在高尔基体中高度富集华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 。

        借助基于脂质的染料,可以对脂筏等特异膜区域进行染色华体汇体育app|最新下载 。使用 NBD-6Cholestrol或NBP-12 Cholesterol 可以观察胆固醇富集区域(Avanti Polar Lipids)华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 。

        除了使用特异性非蛋白荧光染料对细胞区室进行标记之外华体汇体育app|最新下载 ,还可以借助对细胞中不同位置有偏好的蛋白质对目标区域进行染色华体汇体育app|最新下载 。这些蛋白质可以和荧光染料相连,并可通过荧光显微镜进行观察。运用这种方法的一个实例是:麦胚凝集素(WGA) 可以与细胞质膜中的唾液酸和N-乙酰葡萄糖胺基特异性结合华体汇体育app|最新下载 ,将WGA 与荧光染料偶联,这样我们就可以观察到细胞质膜了华体汇体育app|最新下载 。

    离子成像

    在有关神经元方面的研究中华体汇体育app|最新下载 ,观察基因活性或细胞运动等对于了解细胞的离子浓度具有重要意义华体汇体育app|最新下载 。钠、钙华体汇体育app|最新下载 、氯或镁离子对很多不同的细胞活动都具有较大影响华体汇体育app|最新下载 。一般情况下华体汇体育app|最新下载 ,借助荧光标记的螯合剂可将离子困住,螯合剂在结合相应离子后会改变离子的光谱特性。例如,利用该原理的钙指示剂fura-2华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 、indo-1、fluo-3华体汇体育app|最新下载 、fluo-4和Calcium-Green 等。

    对于钠离子的检测华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 ,通常使用 SBFI (sodium-bindingbenzofurzanisophthalate) 或Sodium Green华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 。PBFI(potassium-binding benzofurzanisophthalate) 可以检测钾离子华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 。

    有趣的是,还存在以蛋白质为主的钙指示剂华体汇体育app|最新下载 ,其中一种是基于水母化学发光蛋白—水母素华体汇体育app|最新下载 。水母素华体汇体育app|最新下载 、发光体腔肠素华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 、分子氧和 Ca2+的相互作用会释放蓝光华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 华体汇体育app|最新下载 ,这是在荧光蛋白质的发现过程中非常著名的机制。

    荧光染料及其激发和发射波长峰值

        上文提到的所有染料在下表中均有统计。此外,还涵盖了其他荧光染料及其激发和发射波长峰值。

    荧光染料示例

    激发光

    Indo-1,  Ca saturated

    331 nm

    Indo-1  Ca2+

    346 nm

    Cascade  Blue BSA pH 7.0

    401 nm

    Cascade  Blue

    398 nm

    LysoTracker  Blue

    373 nm

    Alexa  405

    401 nm

    LysoSensor  Blue pH 5.0

    374 nm

    LysoSensor  Blue

    374 nm

    DyLight  405

    399 nm

    DyLight  350

    332 nm

    BFP  (Blue Fluorescent Protein)

    380 nm

    Alexa  350

    343 nm

    7-Amino-4-methylcoumarin  pH 7.0

    346 nm

    Amino  Coumarin

    345 nm

    AMCA  conjugate

    347 nm

    Coumarin

    360 nm

    7-Hydroxy-4-methylcoumarin

    360 nm

    7-Hydroxy-4-methylcoumarin  pH 9.0

    361 nm

    6,8-Difluoro-7-hydroxy-4-methylcoumarin  pH 9.0

    358 nm

    Hoechst  33342

    352 nm

    Pacific  Blue

    404 nm

    Hoechst  33258

    352 nm

    Hoechst  33258-DNA

    352 nm

    Pacific  Blue antibody conjugate pH 8.0

    404 nm

    PO-PRO-1

    434 nm

    PO-PRO-1-DNA

    435 nm

    POPO-1

    433 nm

    POPO-1-DNA

    433 nm

    DAPI-DNA

    359 nm

    DAPI

    358 nm

    Marina  Blue

    362 nm

    SYTOX  Blue-DNA

    445 nm

    CFP  (Cyan Fluorescent Protein)

    434 nm

    eCFP  (Enhanced Cyan Fluorescent Protein)

    437 nm

    1-Anilinonaphthalene-8-sulfonic  acid (1,8-ANS)

    375 nm

    Indo-1,  Ca free

    346 nm

    1,8-ANS  (1-Anilinonaphthalene-8-sulfonic acid)

    375 nm

    BO-PRO-1-DNA

    462 nm

    BOPRO-1

    462 nm

    BOBO-1-DNA

    461 nm

    SYTO  45-DNA

    451 nm

    evoglow-Pp1

    448 nm

    evoglow-Bs1

    448 nm

    evoglow-Bs2

    448 nm

    Auramine  O

    431 nm

    DiO

    487 nm

    LysoSensor  Green pH 5.0

    447 nm

    Cy 2

    489 nm

    LysoSensor  Green

    447 nm

    Fura-2,  high Ca

    336 nm

    Fura-2  Ca2+sup>

    336 nm

    SYTO  13-DNA

    488 nm

    YO-PRO-1-DNA

    491 nm

    YOYO-1-DNA

    491 nm

    eGFP  (Enhanced Green Fluorescent Protein)

    488 nm

    LysoTracker  Green

    503 nm

    GFP  (S65T)

    489 nm

    BODIPY  FL, MeOH

    502 nm

    Sapphire

    396 nm

    BODIPY  FL conjugate

    503 nm

    MitoTracker  Green

    490 nm

    MitoTracker  Green FM, MeOH

    490 nm

    Fluorescein  0.1 M NaOH

    493 nm

    Calcein  pH 9.0

    494 nm

    Fluorescein  pH 9.0

    490 nm

    Calcein

    493 nm

    Fura-2,  no Ca

    367 nm

    Fluo-4

    494 nm

    FDA

    495 nm

    DTAF

    495 nm

    Fluorescein

    495 nm

    Fluorescein  antibody conjugate pH 8.0

    493 nm

    CFDA

    495 nm

    FITC

    495 nm

    Alexa  Fluor 488 hydrazide-water

    493 nm

    DyLight  488

    493 nm

    5-FAM  pH 9.0

    492 nm

    FITC  antibody conjugate pH 8.0

    495 nm

    Alexa  488

    493 nm

    Rhodamine  110

    497 nm

    Rhodamine  110 pH 7.0

    497 nm

    Acridine  Orange

    431 nm

    Alexa  Fluor 488 antibody conjugate pH 8.0

    499 nm

    BCECF  pH 5.5

    485 nm

    PicoGreendsDNA  quantitation reagent

    502 nm

    SYBR  Green I

    498 nm

    Rhodaminen  Green pH 7.0

    497 nm

    CyQUANT  GR-DNA

    502 nm

    NeuroTrace  500/525, green fluorescent Nissl stain-RNA

    497 nm

    DansylCadaverine

    335 nm

    Rhodol  Green antibody conjugate pH 8.0

    499 nm

    Fluoro-Emerald

    495 nm

    Nissl

    497 nm

    Fluorescein  dextran pH 8.0

    501 nm

    Rhodamine  Green

    497 nm

    5-(and-6)-Carboxy-2',  7'-dichlorofluorescein pH 9.0

    504 nm

    DansylCadaverine,  MeOH

    335 nm

    eYFP  (Enhanced Yellow Fluorescent Protein)

    514 nm

    Oregon  Green 488

    498 nm

    Oregon  Green 488 antibody conjugate pH 8.0

    498 nm

    Fluo-3

    506 nm

    BCECF  pH 9.0

    501 nm

    SBFI-Na+

    336 nm

    Fluo-3  Ca2+

    506 nm

    Rhodamine  123, MeOH

    507 nm

    FlAsH

    509 nm

    Calcium  Green-1 Ca2+

    506 nm

    Magnesium  Green

    507 nm

    DM-NERF  pH 4.0

    493 nm

    Calcium  Green

    506 nm

    Citrine

    515 nm

    LysoSensor  Yellow pH 9.0

    335 nm

    TO-PRO-1-DNA

    515 nm

    Magnesium  Green Mg2+

    507 nm

    Sodium  Green Na+

    507 nm

    TOTO-1-DNA

    514 nm

    Oregon  Green 514

    512 nm

    Oregon  Green 514 antibody conjugate pH 8.0

    513 nm

    NBD-X

    466 nm

    DM-NERF  pH 7.0

    509 nm

    NBD-X,  MeOH

    467 nm

    CI-NERF  pH 6.0

    513 nm

    Alexa  430

    431 nm

    Alexa  Fluor 430 antibody conjugate pH 7.2

    431 nm

    CI-NERF  pH 2.5

    504 nm

    Lucifer  Yellow, CH

    428 nm

    LysoSensor  Yellow pH 3.0

    389 nm

    6-TET,  SE pH 9.0

    521 nm

    Eosin  antibody conjugate pH 8.0

    525 nm

    Eosin

    524 nm

    6-Carboxyrhodamine  6G pH 7.0

    526 nm

    6-Carboxyrhodamine  6G, hydrochloride

    525 nm

    Bodipy  R6G SE

    528 nm

    BODIPY  R6G, MeOH

    528 nm

    6 JOE

    520 nm

    Cascade  Yellow antibody conjugate pH 8.0

    399 nm

    Cascade  Yellow

    399 nm

    mBanana

    540 nm

    Alexa  Fluor 532 antibody conjugate pH 7.2

    528 nm

    Alexa  532

    528 nm

    Erythrosin-5-isothiocyanate  pH 9.0

    533 nm

    6-HEX,  SE pH 9.0

    534 nm

    mOrange

    548 nm

    mHoneydew

    478 nm

    Cy 3

    549 nm

    Rhodamine  B

    543 nm

    DiI

    551 nm

    5-TAMRA-MeOH

    543 nm

    Alexa  555

    553 nm

    Alexa  Fluor 555 antibody conjugate pH 7.2

    553 nm

    DyLight  549

    555 nm

    BODIPY  TMR-X, SE

    544 nm

    BODIPY  TMR-X, MeOH

    544 nm

    PO-PRO-3-DNA

    539 nm

    PO-PRO-3

    539 nm

    Rhodamine

    551 nm

    Bodipy  TMR-X conjugate

    544 nm

    POPO-3

    533 nm

    Alexa  546

    562 nm

    BODIPY  TMR-X antibody conjugate pH 7.2

    544 nm

    Calcium  Orange Ca2+

    549 nm

    TRITC

    550 nm

    Calcium  Orange

    549 nm

    Rhodaminephalloidin  pH 7.0

    558 nm

    MitoTracker  Orange

    551 nm

    MitoTracker  Orange, MeOH

    551 nm

    Phycoerythrin

    565 nm

    Magnesium  Orange

    550 nm

    R-Phycoerythrin  pH 7.5

    565 nm

    5-TAMRA  pH 7.0

    553 nm

    5-TAMRA

    549 nm

    Rhod-2

    552 nm

    FM  1-43

    472 nm

    Rhod-2  Ca2+

    553 nm

    Tetramethylrhodamine  antibody conjugate pH 8.0

    552 nm

    FM  1-43 lipid

    473 nm

    LOLO-1-DNA

    568 nm

    dTomato

    554 nm

    DsRed

    563 nm

    Dapoxyl  (2-aminoethyl) sulfonamide

    372 nm

    Tetramethylrhodamine  dextran pH 7.0

    555 nm

    Fluor-Ruby

    554 nm

    Resorufin

    571 nm

    Resorufin  pH 9.0

    571 nm

    mTangerine

    568 nm

    LysoTracker  Red

    578 nm

    Lissaminerhodamine

    572 nm

    Cy 3.5

    578 nm

    Rhodamine  Red-X antibody conjugate pH 8.0

    573 nm

    Sulforhodamine  101, EtOH

    578 nm

    JC-1  pH 8.2

    593 nm

    JC-1

    592 nm

    mStrawberry

    575 nm

    MitoTracker  Red

    578 nm

    MitoTracker  Red, MeOH

    578 nm

    X-Rhod-1  Ca2+

    580 nm

    Alexa  Fluor 568 antibody conjugate pH 7.2

    579 nm

    Alexa  568

    576 nm

    5-ROX  pH 7.0

    578 nm

    5-ROX  (5-Carboxy-X-rhodamine, triethylammonium salt)

    578 nm

    BO-PRO-3-DNA

    574 nm

    BOPRO-3

    574 nm

    BOBO-3-DNA

    570 nm

    Ethidium  Bromide

    524 nm

    ReAsH

    597 nm

    Calcium  Crimson

    589 nm

    Calcium  Crimson Ca2+

    590 nm

    mRFP

    585 nm

    mCherry

    587 nm

    Texas  Red-X antibody conjugate pH 7.2

    596 nm

    HcRed

    590 nm

    DyLight  594

    592 nm

    Ethidium  homodimer-1-DNA

    528 nm

    Ethidiumhomodimer

    528 nm

    Propidium  Iodide

    538 nm

    SYPRO  Ruby

    467 nm

    Propidium  Iodide-DNA

    538 nm

    Alexa  594

    590 nm

    BODIPY  TR-X, SE

    588 nm

    BODIPY  TR-X, MeOH

    588 nm

    BODIPY  TR-X phallacidin pH 7.0

    590 nm

    Alexa  Fluor 610 R-phycoerythrin streptavidin pH 7.2

    567 nm

    YO-PRO-3-DNA

    613 nm

    Di-8  ANEPPS

    469 nm

    Di-8-ANEPPS-lipid

    469 nm

    YOYO-3-DNA

    612 nm

    Nile  Red-lipid

    553 nm

    Nile  Red

    559 nm

    DyLight  633

    624 nm

    mPlum

    587 nm

    TO-PRO-3-DNA

    642 nm

    DDAO  pH 9.0

    648 nm

    Fura  Red, high Ca

    434 nm

    Allophycocyanin  pH 7.5

    651 nm

    APC  (allophycocyanin)

    650 nm

    Nile  Blue, EtOH

    631 nm

    TOTO-3-DNA

    642 nm

    Cy 5

    646 nm

    BODIPY  650/665-X, MeOH

    646 nm

    Alexa  Fluor 647 R-phycoerythrin streptavidin pH 7.2

    569 nm

    DyLight  649

    652 nm

    Alexa  Fluor 647 antibody conjugate pH 7.2

    653 nm

    Alexa  647

    653 nm

    Fura  Red Ca2+

    435 nm

    Atto  647

    644 nm

    Fura  Red, low Ca

    472 nm

    Carboxynaphthofluorescein  pH 10.0

    600 nm

    Alexa  660

    664 nm

    Alexa  Fluor 660 antibody conjugate pH 7.2

    663 nm

    Cy 5.5

    673 nm

    Alexa  Fluor 680 antibody conjugate pH 7.2

    679 nm

    Alexa  680

    679 nm

    DyLight  680

    678 nm

    Alexa  Fluor 700 antibody conjugate pH 7.2

    696 nm

    Alexa  700

    696 nm

    FM  4-64, 2% CHAPS

    506 nm

    FM  4-64

    508 nm


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